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口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測試劑盒使用說明書
點(diǎn)擊次數(shù):93 更新時(shí)間:2025-06-24

口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體 檢測試劑盒使用說明書

【產(chǎn)品簡介】

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV) 非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測試劑盒適用于檢測豬、牛、羊的血  清,可以區(qū)分免疫動(dòng)物和野毒感染動(dòng)物。

本試劑盒采用阻斷 ELISA 法,在酶標(biāo)板條微孔上  預(yù)包被口蹄疫病毒 3ABC 抗原。在試驗(yàn)中,加入稀釋后 的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有口蹄疫病毒抗 原特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去 未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)的單抗,樣本 中的抗體阻斷了單抗與包被板上抗原的結(jié)合;經(jīng)洗滌除 去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入 TMB 底物液,經(jīng) 酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號(hào)與樣本中的抗體含量成反比,加 入終止液終止反應(yīng)后,用酶標(biāo)儀 450nm 波長測定反應(yīng)  孔中的吸光度 OD 值。

【組份】

1抗原預(yù)包被板條1/2 塊6終止液15ml

2酶結(jié)合物11/22ml7陰性對照2ml

310 倍濃縮洗滌液100ml8陽性對照1ml

4顯色液11/22ml9封板膜2/4 張

5說明書1 份10樣本稀釋液100ml

【需自備的設(shè)備及試劑】

1.     微量移液器:10µl-100µl 、100µl-1000µl。

2.     一次性移液器吸頭。

3.     量筒:500ml。

eb

4.     96 孔板酶標(biāo)儀。

5.     蒸餾水或去離子水。

6.     洗瓶或洗板機(jī)。

【樣品制備】

取動(dòng)物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮, 無溶血。

【洗滌液的準(zhǔn)備】

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖 動(dòng)使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作 10 倍 稀釋。稀釋好的洗滌液可在 4℃存放一周左右。

【注意事項(xiàng)】

1.     試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,使用前應(yīng)搖 勻,使用后放回 2-8℃。

2.     不同品種、不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用, 使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。

3.     底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時(shí)應(yīng) 該注意防護(hù)。

4.     TMB(顯色液)不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。

5.     檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包 被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于 2-8℃)。

6.     所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7.     嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程 中移液、定時(shí)和洗滌等的全部過程必須精確。

8.     抗原包被板為一次性用品,不得重復(fù)使用。

【操作步驟】

1.     每次試驗(yàn)均設(shè)置陽性對照 1 孔、陰性對照 2 孔,陰 陽性對照不用稀釋,直接取 100ul 加入反應(yīng)孔。

2.     將待檢板條按 80ul/孔加入樣本稀釋液;

3.     將待檢血清按 20ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻(移液 器槍頭請勿混用);

4.     蓋上封板膜(可按實(shí)際需要自行裁剪),置 22  ( ± 3℃) 過夜反應(yīng)(16-18 小時(shí))。

5.     小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃 度洗滌液每孔加250ul ,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重 復(fù) 6 次,最后在干凈吸水紙上拍干。

6.     每孔加酶結(jié)合物 100µl ,蓋上封板膜置 22  (±3℃) 溫育 60 分鐘。

7.     小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作濃 度洗滌液每孔加250ul ,后甩去孔內(nèi)液體,以上步驟重 復(fù) 6 次,最后在干凈吸水紙上拍干。

8.     每孔加顯色液 100µl ,混勻、蓋上封板膜置 22  ( ± 3℃) 避光顯色 15 分鐘。

9.  每孔加終止液 50 μl ,使反應(yīng)終止,10 分鐘內(nèi)測定 結(jié)果。

【結(jié)果判定】

用酶標(biāo)儀于 450nm(630nm 作參比波長)讀取吸光 度 OD 值。

試驗(yàn)成立的條件是:

陰性對照(N)OD 值>0.6、同時(shí)陽性對照(P)阻斷率>50%;

計(jì)算方法:

PI (阻斷率)= 1 -(樣品 OD 值÷陰性 OD 均值)x100%

陰陽性判斷: 牛、羊樣本

PI(阻斷率)>50%則判斷為陽性; PI≤50%則判斷為陰性。

【有效期】

貯存方法: 2 - 8oC 下貯存。 有效期: 12 個(gè)月。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):

 


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